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制備色譜儀操作流程很重要哦,記得收藏!

更新時間:2021-07-09      點擊次數(shù):3120
   色譜法是指用于從混合物中分離組分的科學實驗室技術。它涉及使溶解在“流動相”中的化合物混合物通過“固定相”,從待混合物中的其他分子中分離和收集待純化的分析物。該技術涵蓋了廣泛的多樣化應用,包括基礎研究,藥物發(fā)現(xiàn),法醫(yī)學,環(huán)境測試,運動員藥物測試和食品/飲料質(zhì)量控制。
  制備色譜儀操作流程也很重要,下面來講講具體的操作:
  (1)分析色譜的目的,是分析出混合物中一個(或者幾個)純物質(zhì)的含量。制備色譜的目的,是從混合物中得到純物質(zhì)。
  為了加快分離的時間與提高分離的效率,制備色譜的的進樣品量很大,導致制備色譜柱子的分離負荷的相應加大,也就必須加大色譜柱填料,增大制備色譜的直徑和長度,使用的相對多的流動相。
  然而,當色譜柱上樣品負載加大的時候,往往導致柱效急劇下降而得不到純的產(chǎn)品。制備色譜,要解決容量與柱子效果之間的矛盾,對重現(xiàn)性也要考慮。從經(jīng)濟上來說。制備色譜要爭取少用填料,少用溶劑,要盡可能多的得到產(chǎn)品。
  (2)樣品的前處理:
  制備色譜柱子由于處理的樣品多,比分析柱子更容易受污染,所以,必要的前處理就顯得非常的必要。萃取、過濾、結(jié)晶、固相萃取等簡單的分離方法,如果用得上,而且還不是很麻煩,就要盡可能多的采用以去掉雜質(zhì)。
  (3)固定相的選擇
  硅膠、鍵合固定相(如C18)、離子交換樹脂、聚酰胺、氧化鋁、凝膠等都可以作為色譜柱的填料。有不少文獻報道,對填料可以進行一下處理提高了分離效果,如,對硅膠進行的硝酸銀(或緩沖液)處理。
  (4)裝柱方法的選擇根據(jù)固定相顆粒度和柱子的尺寸,采用不同的裝柱方法,往往裝填越好分離效果越好。裝柱效果跟填料的顆粒度關系很大,顆粒度的減少會導致裝柱的難度。一般來說,顆粒直徑小于20-30um的固定相采用濕法裝填。所謂“敲擊-裝填”技術適用于顆粒直徑大于25um的固定相。濕法的目的是迫使相對稀松的固定相懸漿以高速裝入色譜柱子,從而減少空隙的形成。然而,當柱直徑大于20mm,所加壓力為30-40bar時,高壓懸漿裝填技術就變得十分復雜。為將小顆粒固定相裝入更大得制備型色譜柱,可采用柱長壓縮技術。這種方法,先將固定相懸漿(或偶爾是干填充物)裝入柱中加壓,利用物理方法將其壓緊。壓緊的方法有兩種:徑向壓縮和軸向壓縮。濕法裝柱需要一定的設備,在柱子填完后,應用有柱效的測量,對柱效低的柱子應該重填。
  (5)流動相的選擇
  除了和分析色譜同樣的考慮外,在選用流動相時,要考慮色譜分離后面加有旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)等二次分離操作。一般來說,不宜采用高毒性溶劑,對多元溶劑要盡可能的少用。
  如果產(chǎn)品中含有大量溶劑,溶劑的純度也要考慮在其中。
  (6)加樣的方法
  可以采用以下方法之一進樣。-用注射器進樣-用旋轉(zhuǎn)閥進樣-通過六通閥進樣-通過主泵進樣-通過輔泵進樣-固體上樣
  (7)泵的選用
  生產(chǎn)制備色譜泵的廠商很多。根據(jù)有無脈沖、能承受的Z大壓力、控制的精度、售后服務等來選擇泵。
  (8)檢測器的選用
  一般的分析池的Z大允許流速僅為5mL/min或者10mL/min。而專門的制備池的Z大允許流速可為150mL/min。有時,采用旁路分離管,將少量流體導入分析池進行檢測,是一個不錯的辦法,但其濃度的誤差會相對較大。
  (9)組分保留時間的估計
  用分析柱子在同等色譜條件下(同樣的固定相和流動相)測定保留時間后,按照單一組分的線流速(不是體積流速)一定,通過計算可以知道組分的大致保留時間區(qū)域。
  分析譜圖的峰形狀,對確定保留時間也有很大的參考價值。
  (10)產(chǎn)品的收集
  手工餾分收集費時費力,自動餾分收集器有很大的方便。許多實驗室和工廠都采用了餾分收集器。
  (11)超載、邊緣切割、ZX切割、放大技術與非線性效用
  在制備色譜中,因為沒有必要達到分析色譜那樣的分離度,可以在一定范圍內(nèi)大大加大進樣的濃度和體積。在做分離的時候,也有一些分析色譜的時候,不能用到的技巧。因為篇幅關系,不在這里敘述。
  (12)柱轉(zhuǎn)換技術
  通過接頭或者閥門,實現(xiàn)柱子的簡單延長,或者比較方便地實現(xiàn)對其中一個(或幾個)組分的精制。
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